• page_banner

Νέα

Η Javascript είναι απενεργοποιημένη αυτήν τη στιγμή στο πρόγραμμα περιήγησής σας.Ορισμένες λειτουργίες αυτού του ιστότοπου δεν θα λειτουργήσουν εάν η JavaScript είναι απενεργοποιημένη.
Εγγραφείτε με τα συγκεκριμένα στοιχεία σας και το συγκεκριμένο φάρμακο που σας ενδιαφέρει και θα αντιστοιχίσουμε τις πληροφορίες που παρέχετε με άρθρα στην εκτενή βάση δεδομένων μας και θα σας στείλουμε ένα αντίγραφο PDF αμέσως.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Department of Infectious Diseases, Suzhou University First Affiliated Hospital, Suzhou City, Jiangsu Province, 215000 Τηλ.όγκοι του πεπτικού συστήματος με 5ετή συνολική επιβίωση 14,1%.Πολλοί ασθενείς με HCC διαγιγνώσκονται σε προχωρημένο στάδιο, επομένως ο έγκαιρος έλεγχος είναι απαραίτητος για τη μείωση της θνησιμότητας από HCC.Εκτός από τους δείκτες ανίχνευσης που χρησιμοποιούνται συνήθως, όπως η άλφα-εμβρυοπρωτεΐνη ορού (AFP), η λεκτίνη-αντιδρώσα άλφα-εμβρυοπρωτεΐνη φακού (AFP-L3) και η μη φυσιολογική προθρομβίνη (πρωτεΐνη II που προκαλείται από ανεπάρκεια βιταμίνης Κ, PIVKA-II), τεχνικές βιοψίας υγρών Έχει αποδειχθεί ότι έχει διαγνωστική αξία στην ανίχνευση HCC.Σε σύγκριση με τις επεμβατικές διαδικασίες, η βιοψία υγρού μπορεί να ανιχνεύσει κυκλοφορούντες κακοήθεις μεταβολίτες.Οι τεχνικές υγρής βιοψίας ανιχνεύουν κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα, κυκλοφορούν DNA όγκου, κυκλοφορούν RNA και εξωσώματα και χρησιμοποιούνται για πρώιμο έλεγχο, διάγνωση και προγνωστική αξιολόγηση του HCC.Αυτό το άρθρο εξετάζει τη μοριακή βιολογία και την εφαρμογή διαφόρων τεχνικών βιοψίας υγρών για την απομόνωση υποσχόμενων βιοδεικτών που μπορεί να είναι βιώσιμες επιλογές για την έγκαιρη αξιολόγηση του HCC για τη βελτίωση της έγκαιρης εξέτασης των ομάδων HCC υψηλού κινδύνου.Λέξεις-κλειδιά: τεχνική βιοψίας υγρού, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, ομάδα υψηλού κινδύνου.
Το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) είναι ένας κοινός κακοήθης όγκος του πεπτικού συστήματος, κατατάσσοντας την έκτη θέση μεταξύ των νέων περιπτώσεων κακοήθων όγκων τόσο στους άνδρες όσο και στις γυναίκες.1 Παγκοσμίως, ο καρκίνος του ήπατος είναι η τρίτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο μετά τον καρκίνο του πνεύμονα και του παχέος εντέρου, αντιπροσωπεύοντας το 8,3% των θανάτων που σχετίζονται με καρκίνο από όλα τα κακοήθη νεοπλάσματα.1 Η πρόγνωση του ΗΚΚ σχετίζεται στενά με το στάδιο της διάγνωσης.Οι κύριοι λόγοι για κακή επιβίωση στο HCC είναι οι ενδοηπατικές μεταστάσεις, οι θρόμβοι όγκου της πυλαίας φλέβας και οι απομακρυσμένες μεταστάσεις που αποκλείουν την εκτομή και πολλά από αυτά τα χαρακτηριστικά είναι ήδη παρόντα στους ασθενείς κατά τη στιγμή της διάγνωσης.
Βάσει διαγνωστικών και θεραπευτικών κατευθυντήριων γραμμών, οι κύριοι παράγοντες κινδύνου για την ανάπτυξη HCC είναι η κίρρωση του ήπατος, η λοίμωξη από τον ιό της χρόνιας ηπατίτιδας Β (HBV) ή από τον ιό της ηπατίτιδας C (HCV), η αλκοολική λιπώδης νόσος του ήπατος και η μη αλκοολική λιπώδης νόσος του ήπατος (NAFLD). ).2 Επιπλέον, οι παράγοντες κινδύνου για HCC περιλαμβάνουν πρόσληψη μολυσμένων με αφλατοξίνες τροφή, σχιστοσωμίαση, άλλες αιτίες κίρρωσης, οικογενειακό ιστορικό καρκίνου του ήπατος, διαβήτη, παχυσαρκία, κάπνισμα και ηπατική βλάβη που προκαλείται από φάρμακα.Οι ομάδες υψηλού κινδύνου 35 και 45 ετών θα πρέπει να κάνουν τακτικό ιατρικό έλεγχο.Ο πρώιμος έλεγχος είναι μια σημαντική στρατηγική πρώιμης θεραπείας για τη βελτίωση της συνολικής επιβίωσης των ασθενών με HCC.
Βιοδείκτες όπως AFP, AFP-L3 και PIVKA-II συνιστώνται για τον πρώιμο έλεγχο του HCC3,4.Οι τεχνικές υγρής βιοψίας έχουν δείξει πολλά υποσχόμενα αποτελέσματα στην έγκαιρη διάγνωση και αξιολόγηση της θεραπείας.5,6 Σημαντική πρόοδος έχει σημειωθεί στην υγρή βιοψία HCC, η οποία μπορεί να έχει υψηλότερη ευαισθησία και ειδικότητα από τους κοινώς χρησιμοποιούμενους δείκτες ορού όπως η AFP (Πίνακας 1).
Το AFP είναι ένας ευρέως χρησιμοποιούμενος βιοδείκτης στο ΗΚΚ και είναι επί του παρόντος ο πιο λεπτομερής βιοδείκτης που χρησιμοποιείται ευρέως για έγκαιρο έλεγχο, διάγνωση και αξιολόγηση της νόσου.Ένα επίμονα αυξημένο επίπεδο AFP θεωρείται παράγοντας κινδύνου για την εξέλιξη του HCC.7,8 Ο ρυθμός ανίχνευσης του μικρού ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (sHCC) αυξάνεται με την ανάπτυξη του υπερήχου και της αξονικής τομογραφίας και η AFP έχει βρεθεί ότι είναι ιδιαίτερα μη ευαίσθητη στην ανίχνευση της hHCC στην κλινική πράξη.Σύμφωνα με μια αναδρομική πολυκεντρική μελέτη9, η AFP θετική βρέθηκε στο 46% (616/1338) των περιπτώσεων HCC και στο 23,4% (150/641) των περιπτώσεων sHCC.Επιπλέον, τα επίπεδα AFP είναι αυξημένα σε ασθενείς με χρόνια ηπατική νόσο και κίρρωση.10 Έτσι, το AFP έχει περιορισμένο αποτέλεσμα διαλογής για sHCC.11 Σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες για την κλινική πρακτική Ασίας-Ειρηνικού για το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, η χρήση του AFP δεν συνιστάται. υψηλότερη διαγνωστική αξία στο HCC.13 Σε σύγκριση με τη βιοψία ιστού, η βιοψία υγρού ανιχνεύει κυρίως μεταβολίτες που σχετίζονται με όγκους στα σωματικά υγρά (αίμα, σάλιο, υπεζωκοτικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό ή ούρα) και είναι λιγότερο διεισδυτική στους ιστούς.14 Επιπλέον, οι υγρές βιοψίες μπορεί να αντικατοπτρίζουν κακοήθη χαρακτηριστικά που δεν υπάρχουν στον πρωτοπαθή ιστό όγκου.15 Οι υγρές βιοψίες δεν δοκιμάζονται ακόμη στην κλινική πράξη για όλους τους τύπους όγκων, αλλά η διαγνωστική τους δυνατότητα στον καρκίνο προσελκύει την προσοχή των ογκολόγων.16 Η υγρή βιοψία μπορεί να ανιχνεύσει κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα (CTCs), κυκλοφορούν DNA όγκου (cDNA), κυκλοφορούν ελεύθερο RNA (ecRNA) και εξωσώματα.Σε αυτό το άρθρο, θα συζητήσουμε τα χαρακτηριστικά, τον ρόλο και την εφαρμογή διαφόρων τεχνικών βιοψίας υγρών στον πρώιμο έλεγχο των ομάδων HCC υψηλού κινδύνου.
Το εξωκυτταρικό DNA (cfDNA) σε δείγματα αίματος από υγιή άτομα περιγράφηκε για πρώτη φορά το 1948 από τους Mandel et al.Το 17 cfDNA είναι ένα θραύσμα DNA χωρίς κύτταρα μήκους περίπου 160–180 bp, που προέρχεται κυρίως από λεμφοκύτταρα και μυελοειδή κύτταρα.Το ctDNA είναι ένα ειδικό μεταλλαγμένο θραύσμα DNA που απελευθερώνεται από κύτταρα όγκου στο περιφερικό αίμα, το οποίο αντιπροσωπεύει τις γονιδιωματικές πληροφορίες των καρκινικών κυττάρων μετά από ορισμένες παθοφυσιολογικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της νέκρωσης, της απόπτωσης και της απέκκρισης.Η αναλογία του ctDNA στο συνολικό cfDNA ποικίλλει ευρέως ανάλογα με τον τύπο του όγκου και τα θραύσματα cDNA αναφέρονται ότι είναι τυπικά μικρότερα από 167 bp σε μήκος.18 Η μελέτη του Underhill έδειξε ότι τα θραύσματα cfDNA είναι γενικά μικρότερα από το κανονικό cfDNA.19 Σε σύγκριση με υγιή άτομα, το συνολικό μήκος των θραυσμάτων cfDNA στο αίμα ασθενών με καρκίνο είναι μικρότερο, επομένως το cfDNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως δείκτης πρώιμου ελέγχου όγκου.Ο εμπλουτισμός ορισμένων υποσυνόλων μηκών θραυσμάτων cfDNA μπορεί να βελτιώσει την ανίχνευση του cDNA που σχετίζεται με μη μεταστατικούς συμπαγείς όγκους.Μελέτες έχουν δείξει ότι το ctDNA βρίσκεται σε πάνω από το 75% των προχωρημένων καρκίνων του παγκρέατος, του παχέος εντέρου, της ουροδόχου κύστης, του γαστρεντερικού, του ήπατος, των ωοθηκών, του μαστού, του μελανώματος και της κεφαλής και του τραχήλου.20,21 Ωστόσο, η ποσότητα του ctDNA στο αίμα εξαρτάται από τη θέση του όγκου.22 Σε μια μελέτη του Bettegoud, ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, του μαστού, του ήπατος, του πνεύμονα και του προστάτη βρέθηκαν να έχουν υψηλότερα επίπεδα cDNA στο αίμα τους από άλλους καρκίνους.Αντίθετα, σε ασθενείς με καρκίνο του στόματος, καρκίνο παγκρέατος, γαστρικό καρκίνο και γλοίωμα, η συγκέντρωση cDNA στο αίμα ήταν χαμηλότερη.είκοσι ένα
Επειδή το ctDNA περιέχει τις ίδιες γενετικές μεταλλάξεις με τα πρωτογενή κύτταρα όγκου, το cDNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση ετερογενών μεταλλάξεων και επιγενετικών αλλαγών ειδικών για όγκους, συμπεριλαμβανομένης της μεθυλίωσης, της υδροξυμεθυλίωσης, των παραλλαγών ενός νουκλεοτιδίου και των παραλλαγών του αριθμού αντιγράφων.είκοσι τρία
Η μεθυλίωση του DNA είναι μια από τις πιο κοινές επιγενετικές αλλαγές που καταλήγουν σε γονιδιακή καταστολή.Σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα, υπάρχουν διαφορές στο συνολικό επίπεδο μεθυλίωσης του γονιδιώματος των καρκινικών κυττάρων, ειδικά στη μεθυλίωση των ογκοκατασταλτικών γονιδίων, τα οποία μπορούν να ανιχνευθούν σε πρώιμο στάδιο, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι αλλαγές στη μεθυλίωση του DNA μπορεί να είναι δείκτης πρώιμης ανίχνευση ογκογένεσης.Τα ογκοκατασταλτικά γονίδια που σχετίζονται με το HCC μπορούν να απενεργοποιηθούν με μεθυλίωση προαγωγέα, διεγείροντας έτσι την ογκογένεση.24 Η μεθυλίωση του DNA είναι ένας ιδανικός δείκτης για την έγκαιρη διάγνωση όγκων λόγω της εξειδίκευσης των ιστών, της ανιχνευσιμότητας και της ανεξαρτησίας από την ηλικία.Επιπλέον, η μεθυλίωση του DNA είναι πιο συχνή σε σύγκριση με τις σωματικές μεταλλάξεις επειδή υπάρχουν περισσότερες περιοχές στόχοι και αρκετές αλλοιωμένες θέσεις CpG σε κάθε περιοχή του γονιδιώματος στόχου.25 Εκτός από πολλαπλές θέσεις CpG, ένας μεγάλος αριθμός ανεξάρτητων υπερμεθυλιωμένων θέσεων στο ctDNA έχει εντοπιστεί στα DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 και RGS10.26 Xu et al.Σύγκριση δειγμάτων cfDNA από 1098 ασθενείς με HCC και 835 υγιείς μάρτυρες, τα γονίδια που σχετίζονται με το HCC βρέθηκαν να συσχετίζονται ισχυρά με τις αντίστοιχες υπογραφές μεθυλίωσης cDNA του πλάσματος.25 Με βάση εργαστηριακή ανάλυση, αναπτύχθηκε ένα μοντέλο πρόβλεψης που περιείχε 10 δείκτες μεθυλίωσης με ευαισθησία και ειδικότητα 85,7% και 94,3%, αντίστοιχα, και αυτοί οι δείκτες συσχετίστηκαν σε μεγάλο βαθμό με τη μάζα του όγκου, το στάδιο του όγκου και την ανταπόκριση στη θεραπεία.Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η χρήση δεικτών μεθυλίωσης cDNA υπόσχεται πολλά στη διάγνωση, την παρακολούθηση και την πρόγνωση του HCC.Σε ένα μοντέλο μεθυλίωσης που αποτελείται από τρία ανώμαλα μεθυλιωμένα γονίδια (APC, COX2, RASSF1A) και ένα miRNA (miR203) που παρουσιάστηκε από τους Lu et al27, η ευαισθησία και η ειδικότητα του μοντέλου 27 για τη διάγνωση του HCC που σχετίζεται με τον HBV ήταν συγκρίσιμες.80%.Επιπλέον, το μοντέλο μπορούσε να ανιχνεύσει το 75% των μη διαγνωσμένων ασθενών με HCC με επίπεδο AFP 20 ng/mL.Το γονίδιο για την πρωτεΐνη 1Α της οικογένειας της περιοχής που σχετίζεται με Ras (RASSF1A) είναι η κύρια επαναλαμβανόμενη αλληλουχία DNA στο ανθρώπινο γονιδίωμα.Araujo et al.κατέληξε στο συμπέρασμα ότι η υπερμεθυλίωση του προαγωγέα RASSF1A θα μπορούσε να είναι ένας πολύτιμος βιοδείκτης για την έγκαιρη εξέταση του HCC και ένας πιθανός μοριακός στόχος για επιγενετική θεραπεία.28 Σε μια μελέτη, η υπερμεθυλίωση του προαγωγέα RASSF1A ορού βρέθηκε στο 73,3% των ασθενών με ΗΚΚ.29 Το μακροχρόνιο διάσπαρτο νουκλεοτιδικό στοιχείο 1 (LINE-1) είναι ένας άλλος πολύ ενεργός μεσολαβητής ρετρομεταφοράς.Η υπομεθυλίωση της LINE-1 βρέθηκε στο DNA του 66,7% των δειγμάτων ορού HCC και συσχετίστηκε με πρώιμη υποτροπή και φτωχή επιβίωση μετά από ριζική εκτομή.29 Η υπερμεθυλίωση είναι μια κοινή γενετική διαδικασία που παίζει μοναδικό ρόλο στην ανάπτυξη ηπατικής κίρρωσης και HCC.30 Αντίθετα, η υδροξυμεθυλίωση είναι μια διαδικασία απομεθυλίωσης που προκαλεί επανενεργοποίηση και έκφραση γονιδίου και η ανίχνευση του προϊόντος 5-υδροξυμεθυλκυτοσίνης (5-hmC) σε αυτή τη διαδικασία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αναγνώριση ενός όγκου.Η μεθυλίωση και η υδροξυμεθυλίωση του cDNA σχετίζονται με την ογκογένεση και μπορεί να συμβάλλουν στον πρώιμο έλεγχο του HCC.Σε μια μελέτη με 2554 άτομα, βρέθηκαν 31 5-hmC σε όλο το γονιδίωμα σε δείγματα cfDNA και 32 γονίδια ταυτοποιήθηκαν συγκρίνοντας αλληλουχίες 5-hmC σε ασθενείς με HCC και ομάδες υψηλού κινδύνου όπως εκείνους με χρόνιες παθήσεις.Διαγνωστικά μοντέλα ηπατικών παθήσεων.και κίρρωση.Αυτό το μοντέλο ήταν ανώτερο από το AFP στη διάκριση του HCC από τον μη όγκο ιστού.
Οι μεταλλάξεις στις κωδικοποιητικές περιοχές μπορεί να οδηγήσουν σε μεταγραφικές ανωμαλίες, οι οποίες μπορεί να οδηγήσουν σε αλλαγές στις αλληλουχίες πρωτεϊνών και τελικά σε καρκίνο.Οι παραλλαγές ενός νουκλεοτιδίου είναι σημαντικοί γονιδιωματικοί δείκτες για τον πρώιμο έλεγχο του όγκου λόγω της υψηλής αξιοπιστίας τους στους ιστούς και της υψηλής εξειδίκευσης όγκου και ιστού.Πολυάριθμες μελέτες που σχετίζονται με HCC που χρησιμοποιούν αλληλούχιση επόμενης γενιάς (NGS) για αλληλουχία εξωμίου και ολόκληρου του γονιδιώματος του καρκίνου έχουν ταυτοποιήσει κοινά μεταλλαγμένα κυτταρικά γονίδια όπως TP53 και CTNNB1, καθώς και πολλά όπως ARID1A, MLL, IRF2.Τα νέα γονίδια, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 και JAK1 εμφανίζουν μέτρια ποσοστά μετάλλαξης. Η ανάλυση της λειτουργίας μεταλλαγμένου γονιδίου υποδηλώνει ότι αλλαγές στην αναδιαμόρφωση της χρωματίνης, τη μεταγωγή σήματος Wnt/β-κατενίνης και JAK/STAT, την οδό του κύκλου των κυττάρων P53, τους επιγενετικούς τροποποιητές, τις οδούς οξειδωτικού στρες, την οδό PI3K/AKT/MTOR και τη RAS/RAF/ Η οδός κινάσης MAPK παίζει κρίσιμο ρόλο στην ογκογένεση του HCC.32,33 Σε μια μελέτη στην οποία ανιχνεύθηκαν μεταλλάξεις που σχετίζονται με όγκους, οι Huang et al διαπίστωσαν ότι η συχνότητα των μεταλλάξεων που σχετίζονται με τον όγκο που εξαρτώνται από το ctDNA ήταν 19,5% και η ειδικότητα ήταν 90% .34 Επιπλέον, οι ασθενείς που παρουσίασαν αγγειακή διήθηση είχαν περισσότερες πιθανότητες να έχουν μεταλλάξεις ctDNA (P=0,041) και μικρότερη επιβίωση χωρίς υποτροπές (P<0,001). Η ανάλυση της λειτουργίας μεταλλαγμένου γονιδίου υποδηλώνει ότι αλλαγές στην αναδιαμόρφωση της χρωματίνης, τη μεταγωγή σήματος Wnt/β-κατενίνης και JAK/STAT, την οδό του κύκλου των κυττάρων P53, τους επιγενετικούς τροποποιητές, τις οδούς οξειδωτικού στρες, την οδό PI3K/AKT/MTOR και τη RAS/RAF/ Η οδός κινάσης MAPK παίζει κρίσιμο ρόλο στην ογκογένεση του HCC.32,33 Σε μια μελέτη στην οποία ανιχνεύθηκαν μεταλλάξεις που σχετίζονται με όγκους, οι Huang et al διαπίστωσαν ότι η συχνότητα των μεταλλάξεων που σχετίζονται με τον όγκο που εξαρτώνται από το ctDNA ήταν 19,5% και η ειδικότητα ήταν 90% .34 Επιπλέον, οι ασθενείς που παρουσίασαν αγγειακή διήθηση είχαν περισσότερες πιθανότητες να έχουν μεταλλάξεις ctDNA (P=0,041) και μικρότερη επιβίωση χωρίς υποτροπές (P<0,001).Η ανάλυση της λειτουργίας μεταλλαγμένου γονιδίου υποδηλώνει ότι αλλαγές στην αναδιαμόρφωση της χρωματίνης, στη σηματοδότηση Wnt/β-κατενίνης και JAK/STAT, στην οδό του κυτταρικού κύκλου P53, στους επιγενετικούς τροποποιητές, στις οδούς οξειδωτικού στρες, στην οδό PI3K/AKT/MTOR και στην οδό κινάσης RAS/RAF/MAPK έναν κρίσιμο ρόλο στην ογκογένεση HCC.32,33 Σε μια μελέτη που βρήκε μεταλλάξεις που σχετίζονται με όγκους, οι Huang et al.διαπίστωσε ότι η συχνότητα των εξαρτώμενων από ctDNA μεταλλάξεων που σχετίζονται με όγκο ήταν 19,5% και η ειδικότητα ήταν 90%..34 Krome того, у пациентов со сосудистой инвазией чаще встречались μεταλλαγές цDNK (P=0,041) και более короткая безрецидивная выживаемость (P<0,001). .34 Επιπλέον, οι ασθενείς με αγγειακή διήθηση είχαν περισσότερες μεταλλάξεις cDNA (P=0,041) και μικρότερη επιβίωση χωρίς νόσο (P<0,001).Η λειτουργική ανάλυση των μεταλλαγμένων γονιδίων αποκάλυψε αναδιαμόρφωση χρωματίνης, σηματοδότηση Wnt/β-κατενίνης και JAK/STAT, οδό κυτταρικού κύκλου P53, επιγενετικούς τροποποιητές, οδό οξειδωτικού στρες, οδό PI3K/AKT/MTOR και RAS/RAF/MAPK Η οδός κινάσης παίζει κρίσιμο ρόλο στην ογκογένεση του HCC. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中,Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%,特异性为90% .34 此外,经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变(P=0,041)和更短的无复发生存期(P<0,001)。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 , huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% , 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变(P=0.041)和更短的无复发生存期(P<0,001).32,33 Σε μια μελέτη που βρήκε μεταλλάξεις που σχετίζονται με όγκους, οι Huang et al.διαπίστωσε ότι οι σχετιζόμενες με όγκο μεταλλάξεις εξαρτώνται κατά 19,5% από το cDNA με ειδικότητα 90% 34. Επιπλέον, οι ασθενείς που είχαν υποβληθεί σε αγγειακή διήθηση ήταν πιο πιθανό να αναπτύξουν cDNA.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). μετάλλαξη (P=0,041) και μικρότερη επιβίωση χωρίς νόσο (P<0,001).Ένα άλλο κοινό γονίδιο οδηγού HCC είναι το TP53, το οποίο έχει ποσοστό μετάλλαξης άνω του 30%.Μελέτες έχουν δείξει ότι η συχνότητα των μεταλλάξεων TP53 στο ctDNA στο αίμα και στα ούρα κυμαίνεται από 5% έως 60%.35 Η μελέτη του Johan έδειξε ότι το φάσμα μετάλλαξης του ctDNA στο όψιμο HCC έχει παρόμοιο ποσοστό μετάλλαξης με το πρώιμο HCC, συμπεριλαμβανομένων του προαγωγέα TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), μεταλλάξεις σε AXIN1 ., ARID2, KMT2D και TSC2 (6% έκαστο).36 Το ογκογονίδιο β-κατενίνης (CTNNB1) παίζει σημαντικό ρόλο στο μονοπάτι σηματοδότησης Wnt.Ο συνενεργοποιητής μεταγραφής CTNNB1 μπορεί να προάγει τη γονιδιακή έκφραση, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αναστολή της απόπτωσης και αγγειογένεση.Το CTNNB1 μπορεί επίσης να αλληλεπιδράσει με το TERT για να προκαλέσει μετασχηματισμό ηπατοκυττάρων.33 Ο προαγωγέας TERT μεταλλάσσεται συχνά σε ορισμένους συμπαγείς όγκους.Οι αλλαγές στο TERT, μια από τις πρώτες γενετικές αλλαγές στον κακοήθη μετασχηματισμό του HCC, μπορεί να οδηγήσουν σε επανενεργοποίηση της τελομεράσης στα κιρρωτικά ηπατοκύτταρα και μπορεί να προάγουν τον πολλαπλασιασμό και να αποτρέψουν τη γήρανση.Μεταλλάξεις στον προαγωγέα 33-37 TERT έχει αναφερθεί ότι συμβαίνουν στο 59-90% των ασθενών με πολλαπλασιαστικά ηπατικά οζίδια και πρώιμο HCC και σχετίζονται με την επιβίωση.38
Οι αλλαγές αριθμού αντιγράφων (CNA) είναι ένας σημαντικός υποτύπος σωματικών μεταλλάξεων.Η έρευνα έχει δείξει ότι το εκτεταμένο και εστιακό βάρος του CNA είναι μια γονιδιωματική υπογραφή ικανή να προβλέψει την ανοσοδιήθηση του όγκου και τον αποκλεισμό σε ορισμένους τύπους καρκίνου.39 Ενεργή σηματοδότηση διήθησης, υψηλή κυτταρολυτική δραστηριότητα, σοβαρή φλεγμονή και γενετικοί δείκτες που σχετίζονται με την παρουσίαση αντιγόνου στο HCC.Η ανάλυση της συστοιχίας δεδομένων των πολυμορφισμών ενός νουκλεοτιδίου σε 477 άτομα αποκάλυψε χαμηλή επιβάρυνση στο ΚΝΣ.Αντίθετα, οι χρωμοσωμικά ασταθείς όγκοι με υψηλό εκτεταμένο φορτίο CNA εμφάνισαν σημάδια απόρριψης του ανοσοποιητικού και συσχετίστηκαν με πολλαπλασιασμό, επιδιόρθωση DNA και δυσλειτουργία TP53.Xu et al.έδειξε ότι η ομάδα HCC είχε υψηλότερες βαθμολογίες CNA από την ομάδα της χρόνιας ηπατικής νόσου.40 Χρησιμοποιώντας την αλληλουχία ολόκληρου του γονιδιώματος ενός μεμονωμένου κυττάρου, τα CNA βρέθηκαν να εμφανίζονται νωρίς στην ηπατοκαρκινογένεση και να παραμένουν σχετικά σταθερά κατά την εξέλιξη του όγκου.41 Chung et al.διαπίστωσε ότι τα επίπεδα cfDNA ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με HCC και ότι τα CNA σε όλο το γονιδίωμα στο cfDNA ήταν ένας σημαντικός ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης σε ασθενείς με HCC που έλαβαν θεραπεία με sorafenib.42 Οι ασθενείς με υψηλότερο φορτίο CNA είχαν περισσότερες πιθανότητες να έχουν εξέλιξη της νόσου και θάνατο από εκείνους με χαμηλότερο φορτίο CNA.Ollerich et al.διαπιστώθηκε ότι ο δείκτης αστάθειας αριθμού αντιγράφων (CNI) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αξιολόγηση του CNA στο cfDNA ασθενών με καρκίνο.Σημείωσαν ότι οι ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο είχαν σημαντικά υψηλότερες βαθμολογίες CNI από μια ομάδα ελέγχου, η οποία αξιολογεί την ανταπόκριση των ασθενών στη συστηματική χημειοθεραπεία και ανοσοθεραπεία.43 Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα CNA που βρέθηκαν σε δείγματα υγρής βιοψίας μπορεί να χρησιμεύσουν ως προγνωστικοί δείκτες σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο.HCC στο υπόβαθρο της συστημικής θεραπείας.
Επί του παρόντος, οι μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση του ctDNA μπορούν να χωριστούν σε στοχευμένες και μη στοχευμένες μεθόδους.Εν συντομία, στοχευμένες μέθοδοι όπως η ψηφιακή αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq και Tam-Seq είναι εξαιρετικά ευαίσθητες σε προκαθορισμένα γονίδια.Μέθοδοι εκτός στόχου, όπως η αλληλουχία ολόκληρου του γονιδιώματος και το NGS παρέχουν μια ολοκληρωμένη εικόνα ολόκληρου του γονιδιωματικού τοπίου.44 Σε σύγκριση με τα πλαίσια στόχου, η αλληλουχία ολόκληρου του γονιδιώματος μπορεί να ανιχνεύσει όχι μόνο σημειακές μεταλλάξεις και εισαγωγές, αλλά και αναδιατάξεις και παραλλαγές αριθμού αντιγράφων.η πρόγνωση και το CTC και το cfDNA είναι καλοί δείκτες που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη δυναμική παρακολούθηση του HCC.45 Επιπλέον, η ανάλυση cfDNA μπορεί να είναι πιο χρήσιμη για την ανίχνευση HCC.Οι Yan et al.έδειξε ότι το cfDNA στο πλάσμα των ασθενών με HCC ήταν σημαντικά υψηλότερο από ό,τι σε ασθενείς με ηπατική ίνωση και υγιείς μάρτυρες.Σε σύγκριση με το AFP, το ctDNA αναμένεται να είναι καλύτερος δείκτης διαλογής για πρώιμο HCC.46 Σε μια προοπτική μελέτη 47 υγρών βιοψιών που εξέτασαν το cfDNA και την πρωτεΐνη σε πληθυσμό πληθυσμού, αποδείχθηκε ότι είναι αποτελεσματικές στη διαφοροποίηση ασθενών με HCC από ασθενείς χωρίς HCC.Σε μια παρακολούθηση 331 υπερηχογράφων φυσιολογικών και AFP-αρνητικών ασθενών, η ευαισθησία και η ειδικότητα του cfDNA για τη διάγνωση του HCC ήταν 100% και 94%, αντίστοιχα, έτσι το cDNA μπορούσε να ανιχνεύσει το HCC σε ασυμπτωματικά οροθετικά άτομα HBsAg.Στη μελέτη Yeo48, βρέθηκε υψηλή συχνότητα (92,5%) υπερμεθυλίωσης του προαγωγέα RASSF1A σε ασθενείς με HCC.Επιπλέον, οι Xu et al.δημιούργησε ένα διαγνωστικό μοντέλο για την πρόβλεψη του HCC χρησιμοποιώντας μια ομάδα ειδικών δεικτών μεθυλίωσης με ειδικότητα και ευαισθησία 90,5% και 83,3%, αντίστοιχα.Το πάνελ επιτρέπει στους ασθενείς με HCC να διακρίνονται από τους ασθενείς με άλλες ηπατικές παθήσεις, κάτι που είναι καλύτερο από το AFP.Διαπίστωσαν επίσης ότι οι φυσιολογικοί μάρτυρες που βρέθηκαν θετικοί μπορεί να έχουν παράγοντες κινδύνου για HCC, όπως λοίμωξη από HBV ή ιστορικό χρήσης αλκοόλ.25 Υποθέτουμε ότι οι παράγοντες υψηλού κινδύνου για HCC μπορεί να προάγουν την υπερμεθυλίωση του cfDNA, η οποία στη συνέχεια συμβάλλει στην εξέλιξη του HCC, και έτσι το cfDNA μπορεί να διαδραματίσει βασικό ρόλο στον έλεγχο για ομάδες υψηλού κινδύνου.Cai et al.συνοψίζει το πλήρες φάσμα των μεταλλάξεων του ctDNA και προσφέρει μια ισχυρή στρατηγική για την αξιολόγηση του φορτίου του όγκου στους ασθενείς.49 Αυτή η στρατηγική μπορεί να αναγνωρίσει την ογκογένεση κατά μέσο όρο 4,6 μήνες πριν από την αλλαγή της απεικόνισης και έχει δείξει ανώτερη διαγνωστική απόδοση σε σύγκριση με τους βιοδείκτες ορού AFP, AFP-L3 και PIVKA-II.Η διαγνωστική αξία της δοκιμής cDNA έχει αποδειχθεί όταν η αξιολόγηση εικόνας δεν είναι διαθέσιμη, επομένως η δοκιμή cDNA έχει αξία για τη διάγνωση πρώιμου HCC σε ομάδες υψηλού κινδύνου.Πρόσφατα, οι επιστήμονες χρησιμοποίησαν την τεχνολογία NGS για να αναλύσουν δείκτες πολυμεταβλητής γενετικής παραλλαγής (συμπεριλαμβανομένης της 5-υδροξυμεθυλοκυτοσίνης, του μοτίβου 5', του κατακερματισμού, του ίχνους νουκλεοσώματος, HIFI) σε 3204 κλινικά δείγματα και cfDNA.50 επαναεπικυρωμένα μοντέλα HIFI με τρία ανεξάρτητα σύνολα αμαξοστοιχιών, δοκιμών και δοκιμών έδειξαν σταθερή και αξιόπιστη διάκριση μεταξύ πληθυσμών HCC και μη HCC με ευαισθησία 95,79% και 95,42% στα ειδικά για HCC σετ δοκιμών και δοκιμών, αντίστοιχα.Τα φύλα ήταν 95,00% και 97,83%, αντίστοιχα.Η διαγνωστική αξία της μεθόδου HIFI είναι υψηλότερη από αυτή της AFP στη διάκριση του HCC από την κίρρωση.Επιπλέον, το ctDNA χρησιμοποιείται επίσης στη χειρουργική θεραπεία.Οι Atsushi et al.προσδιόρισε τα προεγχειρητικά επίπεδα του ctDNA στον ορό σε ασθενείς με HCC και διαπίστωσε ότι το ποσοστό υποτροπής και το ποσοστό εξωηπατικής μετάστασης στη θετική ομάδα cDNA ήταν σημαντικά υψηλότερα από ό,τι στην αρνητική ομάδα cDNA και τα επίπεδα cDNA συσχετίστηκαν σημαντικά.με εξέλιξη του όγκου.51 Όντας ένας εξαιρετικά ευαίσθητος βιοδείκτης, το ctDNA μπορεί να προβλέψει την ικανότητα του HCC να εισβάλει στα αγγεία.Οι Wang et al.πραγματοποίησε αλληλουχία ολόκληρου του γονιδιώματος σε 46 ασθενείς με HCC και η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η τιμή κατωφλίου της συχνότητας αλληλόμορφων της παραλλαγής cDNA για εισβολή σε μικροαγγεία είναι 0,83%, ευαισθησία 89,7% και ειδικότητα 80,0%.ένας ανεξάρτητος παράγοντας κινδύνου για μικροαγγειακή εισβολή σε εξαιρέσιμο HCC, υποδηλώνοντας ότι το cDNA μπορεί να βοηθήσει στην καθοδήγηση της βέλτιστης θεραπείας.Συμπερασματικά, το ctDNA εμπλέκεται πλήρως στην εμφάνιση και ανάπτυξη HCC και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για έγκαιρο έλεγχο, χειρουργική αξιολόγηση και παρακολούθηση της νόσου.
Τα CTC είναι κακοήθη κύτταρα που προέρχονται από πρωτογενείς όγκους ή μεταστάσεις που δίνουν μετάσταση στην κυκλοφορία του αίματος.Τα καρκινικά κύτταρα εκκρίνουν μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας (MMPs), οι οποίες διασπούν τη βασική μεμβράνη, επιτρέποντας στα κύτταρα του όγκου να εισέλθουν απευθείας στο αίμα και στα λεμφαγγεία.Ωστόσο, τα περισσότερα CTC εξαλείφονται γρήγορα από ανοϊκές, ανοσολογικές προσβολές ή διατμητικό στρες.53 Η επιθηλιακή-μεσεγχυματική μετάβαση (EMT) επιτρέπει στα CTC να απομονώνονται εύκολα από τον πρωτογενή ιστό του όγκου, να εισβάλλουν στα τριχοειδή και να αποκτούν σημαντικά βελτιωμένη επιβίωση, μετάσταση, επεμβατικότητα και αντοχή στα φάρμακα.Μελέτες έχουν δείξει ότι υπάρχει βαθιά ετερογένεια μεταξύ των διαφόρων καρκινικών κυττάρων στους πρωτογενείς μεταστατικούς όγκους.Έτσι, η ανάλυση CTC μπορεί να οδηγήσει σε μια ολοκληρωμένη κατανόηση της ετερογένειας των καρκινικών κυττάρων.54
Ειδικοί δείκτες για CTC που σχετίζονται με HCC περιλαμβάνουν glypican-3 (GPC3), υποδοχέα ασιαλογλυκοπρωτεΐνης (ASGPR), μόριο προσκόλλησης επιθηλιακών κυττάρων (EpCAM) και δείκτες που σχετίζονται με βλαστοκύτταρα όπως CD44, CD90, 55 και διακυτταρική προσκόλληση (ICAM1).) .56 Ο δείκτης GPC3 είναι μια πρωτεΐνη αγκυρωμένη στην κυτταρική μεμβράνη που χρησιμοποιείται κλινικά για παθολογική ανάλυση και χαρακτηρισμό του HCC.57 Η έκφραση του GPC3 είναι πιο συχνή σε κύτταρα όγκου HCC με ενδιάμεση και χαμηλή διαφοροποίηση και προάγει την εξωηπατική μετανάστευση.Επιπλέον, η παρουσία GPC3+ CTC υποδηλώνει μεταστατικό HCC.58 Το ASGPR είναι μια διαμεμβρανική πρωτεΐνη που εκφράζεται μόνο στην επιφάνεια των ηπατοκυττάρων και εκφράζεται σε μεγάλο βαθμό σε καλά διαφοροποιημένο HCC.Η EpCAM είναι μια από τις πιο συχνά χρησιμοποιούμενες πρωτεΐνες που σχετίζονται με τη μεμβράνη για τη σύλληψη CTC.Το EpCAM έχει αναγνωριστεί ως επιφανειακός δείκτης HCC κυττάρων με χαρακτηριστικά βλαστοκυττάρων,59 που συσχετίζεται με διάφορα κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά του HCC, όπως αγγειακή εισβολή, αξιολογημένα επίπεδα AFP και προχωρημένο στάδιο καρκίνου του ήπατος στο Νοσοκομείο της Βαρκελώνης (BCLC).Ο φαινότυπος 60 CTC EMT είναι εξαιρετικά μεταστατικός.54 διεργασίες EMT στο CTC προάγουν τη μετάσταση HCC.Έκφραση δεικτών EMT όπως βιμεντίνη, συστροφή, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας και E-cadherin έχουν μελετηθεί σε CTC που προέρχονται από το ήπαρ από ασθενείς με HCC.58 Το σύστημα CanPatrol™ που αναπτύχθηκε από τον Cheng [61] ταξινόμησε τα CTC σε τρεις φαινοτυπικές υποομάδες με βάση τους δείκτες που εκφράζονται κυρίως: επιθηλιακός φαινότυπος (EpCAM, CK8/18/19), μεσεγχυματικός φαινότυπος (βιμεντίνη, κουλουριασμένος) και μικτοί φαινότυποι.Σε 176 ασθενείς, η συνολική CTC ήταν ανώτερη από την AFP στη διαφοροποίηση του HCC από την καλοήθη ηπατική νόσο.Οι τιμές AUC για το συνολικό CTC, AFP και το συνδυασμένο συνολικό CTC και AFP ήταν 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) και 0,821 (95% CI, 56–0,7. ).), αντίστοιχα.Η ταξινόμηση CTC με βάση την EMT μπορεί να προβλέψει τη διάγνωση HCC, την πρώιμη υποτροπή, τη μετάσταση και τον μικρότερο συνολικό χρόνο.
Επί του παρόντος, οι μέθοδοι ανίχνευσης CSC περιλαμβάνουν φυσικές μεθόδους και βιολογικές μεθόδους.Οι φυσικές μέθοδοι, που συχνά αναφέρονται ως εμπλουτισμός με βάση τις βιοφυσικές ιδιότητες, εξαρτώνται κυρίως από τις φυσικές ιδιότητες του CSC, όπως το μέγεθος, η πυκνότητα, το φορτίο, η κινητικότητα και η παραμόρφωση.Ανάλογα με τις φυσικές ιδιότητες, υπάρχουν διάφορες μέθοδοι όπως συστήματα που βασίζονται σε διήθηση, διηλεκτροφόρηση κ.λπ. Η τελευταία, γνωστή και ως εμπλουτισμός με βάση την ανοσοσυγγένεια, βασίζεται κυρίως στη δέσμευση αντιγόνου-αντισώματος, καθώς η μέθοδος χρησιμοποιεί αντισώματα έναντι ειδικών για όγκους βιοδεικτών όπως EpCAM, ASGPR, υποδοχέας ανθρώπινου επιδερμικού αυξητικού παράγοντα 2 (HER2), προστατικό ειδικό αντιγόνο (PSA), ανθρώπινη πανκυτοκερατίνη (P-CK) και καρβαμοϋλοφωσφορική συνθάση 1 (CPS1).62 Ένας άλλος τύπος, που ονομάζεται μέθοδος μη εμπλουτισμού, χρησιμοποιεί κυτταρομετρία ροής για να διαφοροποιήσει τα CTC από τα λευκοκύτταρα με βάση την υψηλότερη αναλογία πυρηνικού προς κυτταροπλασματικό και μέγεθος.Επί του παρόντος, η μόνη εγκεκριμένη από την FDA δοκιμή για την ανίχνευση CTC είναι το σύστημα Cell-Search™, το οποίο χρησιμοποιεί τον δείκτη επιφανείας κυττάρου EpCAM. Ωστόσο, η ανίχνευση CTC με βάση συνδυασμένους δείκτες θα μπορούσε να αυξήσει το ποσοστό θετικότητας.54 Ένα μείγμα αντισωμάτων κατά ASGPR και CPS1 πέτυχε ποσοστό ανίχνευσης CTC 91% σε ασθενείς με HCC.63 Οι Zhang et al χρησιμοποίησαν ένα CTC-Chip με αντισώματα κατά ASGPR, P -CK και CPS1, και διαφοροποίησαν ασθενείς με HCC από εκείνους με καλοήθη ηπατική νόσο ή καρκίνο μη HCC σε ποσοστό 100%.64 Μια μελέτη από τον Wang ανίχνευσε EpCAM+ CTC στο 60% από 42 ασθενείς με HCC και βρήκε σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των δύο θετικών ποσοστό και ο αριθμός των CTC με στάδιο TNM.65 Οι Guo et al διαπίστωσαν ότι η βαθμολογία PCR προερχόμενη από CTC ήταν αυξημένη σε 125/171 (73%) ασθενείς των οποίων το επίπεδο AFP ήταν <20 ng/mL με ευαισθησία 72,5% και ειδικότητα 95,0%, σε σύγκριση με 57,0% και 90,0% για την AFP σε αποκοπή 20 ng/mL.66 Ο συνδυασμός AFP και CTC μπορεί να βελτιώσει την ανίχνευση HCC.45 Πιστεύεται ότι τα CTC έχουν πλεονέκτημα έναντι του AFP στον πρώιμο έλεγχο των ομάδων σε υψηλό κίνδυνο για HCC. Ωστόσο, η ανίχνευση CTC με βάση συνδυασμένους δείκτες θα μπορούσε να αυξήσει το ποσοστό θετικότητας.54 Ένα μείγμα αντισωμάτων κατά ASGPR και CPS1 πέτυχε ποσοστό ανίχνευσης CTC 91% σε ασθενείς με HCC.63 Οι Zhang et al χρησιμοποίησαν ένα CTC-Chip με αντισώματα κατά ASGPR, P -CK και CPS1, και διαφοροποίησαν ασθενείς με HCC από εκείνους με καλοήθη ηπατική νόσο ή καρκίνο μη HCC σε ποσοστό 100%.64 Μια μελέτη από τον Wang ανίχνευσε EpCAM+ CTC στο 60% από 42 ασθενείς με HCC και βρήκε σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των δύο θετικών ποσοστό και ο αριθμός των CTC με στάδιο TNM.65 Οι Guo et al διαπίστωσαν ότι η βαθμολογία PCR προερχόμενη από CTC ήταν αυξημένη σε 125/171 (73%) ασθενείς των οποίων το επίπεδο AFP ήταν <20 ng/mL με ευαισθησία 72,5% και ειδικότητα 95,0%, σε σύγκριση με 57,0% και 90,0% για την AFP σε αποκοπή 20 ng/mL.66 Ο συνδυασμός AFP και CTC μπορεί να βελτιώσει την ανίχνευση HCC.45 Πιστεύεται ότι τα CTC έχουν πλεονέκτημα έναντι του AFP στον πρώιμο έλεγχο των ομάδων σε υψηλό κίνδυνο για HCC.Ωστόσο, η συνδυασμένη ανίχνευση των CTC βάσει δεικτών μπορεί να αυξήσει το ποσοστό των θετικών αποτελεσμάτων.54 Ένα μείγμα αντισωμάτων anti-ASGPR και CPS1 πέτυχε ποσοστό ανίχνευσης CTC 91% σε ασθενείς με HCC.63 Zhang et al.χρησιμοποίησε ένα CTC-Chip με αντισώματα κατά των ASGPR, P-CK και CPS1, και επίσης διέκρινε τους ασθενείς με HCC από εκείνους με καλοήθη ηπατική νόσο ή μη HCC σε ποσοστό 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo και соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный од ЦОК, был повышен во 125/171 (73%) παθητικός, σε 73% ευαισθησία, 73% και ειδικότητα 95,0% σε σχέση με 57,0% και 90,0% για AFP για αγορά 20 ng/ml. γκρουπп. συχνότητα και αριθμός CTC με στάδιο TNM.65 Οι Guo et al διαπίστωσαν ότι η PCR που προέρχεται από CTCs ήταν αυξημένη σε 125/171 (73%) ασθενείς που είχαν επίπεδα AFP <20 ng/mL με ευαισθησία 72,5% και ειδικότητα 95,0% σε σύγκριση με 57,0% και 90,0% για την AFP σε επίπεδο αποκοπής 20 ng/mL.66 Ο συνδυασμός AFP και CTC μπορεί να βελτιώσει την ανίχνευση HCC.45 CTC θεωρείται ότι έχουν πλεονέκτημα έναντι της AFP στον πρώιμο έλεγχο ομάδες.με υψηλό κίνδυνο HCC.Ωστόσο, η συνδυασμένη ανίχνευση CTC βάσει δείκτη μπορεί να αυξήσει το ποσοστό των θετικών αποτελεσμάτων.54 Ένα μείγμα αντισωμάτων anti-ASGPR και CPS1 πέτυχε ποσοστό ανίχνευσης CTC 91% σε ασθενείς με HCC.63 Zhang et al.χρησιμοποίησε τσιπ CTC με αντισώματα κατά των ASGPR, P-CK και CPS1 και διέκρινε τους ασθενείς με HCC από καλοήθη ηπατική νόσο και μη HCC με 100%.64 Η μελέτη του Wang αναγνώρισε το 60% των CTC EpCAM+ σε 42 ασθενείς με HCC και βρήκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της επίπτωσης και του αριθμού των CTC στο στάδιο TNM. 65 Guo 等人发现,在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中,CTC 衍生的PCR 评分升高,敏感性为72.5%,特异性为95.0%,而AFP 在截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%。 65 Guo 等 人 发现 在 在 水平 水平 水平 水平 水平 名 名 名 名 名 名 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值为20ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) παθήσεις με αδράνεια AFP <20 ng/ml βαρηκοΐας PCR, με βοηθητικό ΚΟΣΚ, με συναίσθηση 72,5% και αίσθημα ευαισθησίας отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. διαπιστώθηκε ότι σε 125/171 (73%) ασθενείς με επίπεδα AFP <20 ng/mL, οι τιμές PCR που προέρχονται από CTC ήταν αυξημένες με ευαισθησία 72,5% και ειδικότητα 95,0%, ενώ η AFP ήταν στην ειδικότητα αποκοπής ήταν 20 ng/mL.ml ήταν 57,0% και 90,0%.66 Ο συνδυασμός ORP και CTC βελτιώνει την ανίχνευση HCC.45 Οι CTC πιστεύεται ότι είναι ανώτεροι από την AFP στον πρώιμο έλεγχο πληθυσμών HCC υψηλού κινδύνου.Έτσι, για ομάδες HCC θετικές και υψηλού κινδύνου για CTC, η εξέταση CTC θα πρέπει να συνδυάζεται τακτικά με ανίχνευση υπερήχων και AFP.Ωστόσο, τα CTC θεωρούνται σημαντικοί προγνωστικοί παράγοντες μετάστασης και υποτροπής όγκου και η ανίχνευση των CTC δεν συνιστάται ανεξάρτητα ως διαγνωστικό εργαλείο.62 Επομένως, το CTC μπορεί να χρησιμεύσει ως καλύτερος προγνωστικός βιοδείκτης από άλλους δείκτες που χρησιμοποιούνται σήμερα. Οι Zhou et al διαπίστωσαν ότι οι ασθενείς με αυξημένο αριθμό CTCs EpCAM+ και ρυθμιστικά Τ κύτταρα εμφάνισαν υψηλότερο κίνδυνο εμφάνισης υποτροπής HCC, από εκείνους με χαμηλό αριθμό CTC, με αναλογία υποτροπής 66,7% έναντι 10,3% (P <0,001).67 Μια παρόμοια μελέτη αναφέρθηκε από τους Zhong et al.68 Επιπλέον, ο Qi διαπίστωσε ότι 101 από τους 112 ασθενείς (90,81%) με HCC, συμπεριλαμβανομένων εκείνων με νόσο σε πρώιμο στάδιο, ήταν θετικοί για CTCs και ότι πολύ μικρά οζίδια HCC εντοπίστηκαν μετά από 3 έως 5 μήνες παρακολούθησης. Οι Zhou et al διαπίστωσαν ότι οι ασθενείς με αυξημένο αριθμό CTCs EpCAM+ και ρυθμιστικά Τ κύτταρα εμφάνισαν υψηλότερο κίνδυνο εμφάνισης υποτροπής HCC από εκείνους με χαμηλό αριθμό CTC, με αναλογία υποτροπής 66,7% έναντι 10,3% (P < 0,001).67 A παρόμοια μελέτη αναφέρθηκε από τους Zhong et al.68 Επιπλέον, ο Qi διαπίστωσε ότι 101 από τους 112 ασθενείς (90,81%) με HCC, συμπεριλαμβανομένων εκείνων με νόσο σε πρώιμο στάδιο, ήταν θετικοί για CTCs και ότι πολύ μικρά οζίδια HCC εντοπίστηκαν μετά από 3 έως 5 μήνες παρακολούθησης. Чжоу και δρ.обнаружили, что у пациентов со повышенным количеством COK EpCAM+ και ρυθμιστικό T-kletok ρίσκο να αυξήσει την απόκριση GCK был περισσότερο, εάν το παθητικό είναι μικρότερο από το μικρότερο ποσοστό COK, με μικρότερο ποσοστό 7% (P60,7%) Οι Zhou et al διαπίστωσαν ότι οι ασθενείς με αυξημένα CTC EpCAM+ και ρυθμιστικά Τ κύτταρα είχαν υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής HCC από εκείνους με χαμηλά CTC, με ποσοστό υποτροπής 66,7% έναντι 10,3% (P<0,001)67.Μια παρόμοια μελέτη διεξήχθη από τους Zhong et al.68. Επιπλέον, το Qi διαπίστωσε ότι 101 από τους 112 ασθενείς (90,81%) με HCC, συμπεριλαμβανομένων εκείνων με πρώιμη νόσο, είχαν CTCs και ότι πολύ μικρά οζίδια HCC εντοπίστηκαν μετά από 3 έως 5 μήνες παρακολούθησης. Zhou 等人发现,与CTC 数量较少的患者相比,EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高,复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 , epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 , 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)………………………………………………. Чжоу και δρ.обнаружили, что пациенты со повышенным количеством ЦОК EpCAM+ και ρυθμιστικό Т-κλετόκ ονοματεπώλησε τον κίνδυνο ανακρίβειας ГЦК по сравнению со пациентами со миньшим количество со миньшим количеством миньшим количество со миньшим количество со миньшим количеством миньшим количеством миньшим количество со миньшим количество со миньшим количество со миньшим количеством 1,7% από 1,7% 1,7% 1,7% 1,7% 1,0% 1,60% 1% Οι Zhou et al.διαπίστωσαν ότι οι ασθενείς με αυξημένα EpCAM+ CTC και ρυθμιστικά Τ κύτταρα είχαν υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής HCC σε σύγκριση με ασθενείς με λιγότερα CTC, με ποσοστά υποτροπής 66,7% και 10,3%, αντίστοιχα (P < 0,001).Μια παρόμοια μελέτη αναφέρθηκε από τους Zhong et al.68 Επιπλέον, ο Qi διαπίστωσε ότι 101 από τους 112 ασθενείς με HCC (90,81%), συμπεριλαμβανομένων ασθενών με πρώιμη νόσο, είχαν θετικά αποτελέσματα CTC και βρήκαν πολύ μικρά οζίδια HCC μετά από 3 επισκέψεις.Παρατήρηση έως 5 μήνες.Βρήκαν επίσης CTC σε 12 ασθενείς με χρόνια λοίμωξη HBV και βρήκαν μικρούς όγκους HCC εντός 5 μηνών σε 2 CTC θετικούς ασθενείς.69 Έτσι, τα CTC μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την πρόβλεψη του HCC, 70 αλλά μπορούν να χρησιμοποιηθούν πιο τακτικά ως προγνωστικοί βιοδείκτες.
Όπως το cfDNA, έτσι και το cfRNA απελευθερώνεται στην κυκλοφορία του αίματος μέσω διαφόρων συστημάτων.Αυτά τα μόρια στο περιφερικό αίμα αντιπροσωπεύουν τον καρκινικό ιστό προέλευσης.Σε σύγκριση με τους δείκτες που ανιχνεύονται με μη επεμβατικές μεθόδους, τα cfRNA είναι πιο δυναμικά ρυθμισμένα, ειδικά για τον ιστό και άφθονα στο εξωκυτταρικό περιβάλλον.Η σημασία και η διαγνωστική αξία των 71 miRNAs (miRNAs) στο HCC έχει αναφερθεί σε πολλές μελέτες.Τα miRNA είναι ενδογενή μη κωδικοποιητικά RNA (ncRNAs) που ρυθμίζουν διάφορες μοριακές βιολογικές δραστηριότητες αναστέλλοντας τη μετάφραση των αγγελιαφόρων RNA-στόχων (mRNAs).Τα miRNA βρίσκονται σε αποπτωτικά σώματα ενθυλακωμένα σε εξωσώματα, αλλά μπορούν επίσης να συνδεθούν σταθερά με τις πρωτεΐνες και τα λιπίδια του ορού στο περιφερικό αίμα και μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την αξιολόγηση του HCC.Τα microRNA εμπλέκονται στην αναγέννηση του ήπατος, στον μεταβολισμό των λιπιδίων, στην απόπτωση, στη φλεγμονή και στην ανάπτυξη HCC.72 Ογκογόνα miRNAs όπως τα miR-21, miR-155 και miR-221 είναι ευρέως γνωστά στο HCC.Συγκεκριμένα, το miR-21 παίζει βασικό ρόλο στη σύνθεση κολλαγόνου στην εξωκυτταρική μήτρα και την ίνωση και προάγει την ηπατοκαρκινογένεση ενεργοποιώντας αιμοποιητικά βλαστοκύτταρα.72,73 Τα ογκοκατασταλτικά miRNA στο HCC περιλαμβάνουν τα miRNA-122, miRNA-29, την οικογένεια Let-7 και την οικογένεια miRNA-15.Η οικογένεια Let-7 αποτελείται από πολλά ογκοκατασταλτικά miRNA που στοχεύουν την οικογένεια RAS.Η οικογένεια miR-15 περιλαμβάνει τα miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 και miR-497, τα οποία έχουν συμπληρωματικές αλληλουχίες για ορισμένα mRNA.Επιπλέον, τα μακρά μη κωδικοποιητικά RNA (lncRNAs) και τα κυκλικά RNA (cirRNAs) είναι επίσης σημαντικά για τον πρώιμο έλεγχο του HCC.Τα lncRNA αντιπροσωπεύουν την ευρύτερη κατηγορία ncRNA, συμπεριλαμβανομένων των ncRNA που μοιάζουν με mRNA, και εμπλέκονται στην παθογένεση πολλών ανθρώπινων ασθενειών.Τα LncRNA παίζουν ρυθμιστικό ρόλο στο μικροπεριβάλλον του ήπατος και στη χρόνια ηπατική νόσο.74 Τα CircRNA είναι επίσης μια κατηγορία ncRNA με πολλαπλές λειτουργίες στη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης.Πρόσφατα, τα circRNAs έχουν θεωρηθεί ως διαγνωστικά εργαλεία για HCC.
Το κυκλοφορούν ελεύθερο RNA έχει αξιοσημείωτη σταθερότητα, συμπεριλαμβανομένης της αντίστασης στη θερμοκρασία, το pH και την RNase, γεγονός που καθιστά την απομόνωση του fnRNA από το περιφερικό αίμα λιγότερο κουραστική χρησιμοποιώντας τυπικές μεθόδους καθαρισμού RNA.Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες μέθοδοι περιλαμβάνουν NGS, microarray και RT-qPCR.Το NGS επιτρέπει τη μέτρηση των microRNA σε όλο το γονιδίωμα.Ωστόσο, αυτή η μέθοδος είναι ακριβή και η ανάλυση δεν είναι τυποποιημένη.Αντίθετα, η RT-qPCR είναι φθηνή, ενισχύει γρήγορα τα νουκλεϊκά οξέα και προσφέρει πολλά πλεονεκτήματα όπως υψηλότερη ευαισθησία, μεγαλύτερη ακρίβεια, ευρύτερο δυναμικό εύρος και απαίτηση λιγότερων δειγμάτων.Οι μικροσυστοιχίες είναι μια άλλη μέθοδος που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση miRNA που βασίζεται στον ευαίσθητο και ειδικό υβριδισμό των στοχευόμενων miRNAs με συμπληρωματικούς ανιχνευτές DNA, 75 αλλά η ανάλυση των δεδομένων μικροσυστοιχιών είναι χρονοβόρα.
Τα κυκλοφορούντα miR-122 και Let-7 έχουν αναφερθεί ότι είναι δυνητικά χρήσιμα στη διάγνωση πρώιμου σταδίου HCC σε ομάδες υψηλού κινδύνου, δεικτών σε ασθενείς με προκακοήθεις όζους που σχετίζονται με HBV και HCC πρώιμου σταδίου.76 Cai et al.διαπίστωσε ότι τα μέλη της οικογένειας Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 και miR-199a/b) διατρέχουν κίνδυνο χρόνιας HCC σε ασθενείς με ηπατίτιδα.Η οικογένεια Let-7 μπορεί να χρησιμεύσει ως ένας αποτελεσματικός υποκατάστατος βιοδείκτης για την πρόβλεψη της ανάπτυξης HCC σε ομάδες υψηλού κινδύνου που σχετίζονται με χρόνια ηπατίτιδα C. Το 77 miR-122 έχει υψηλή διαγνωστική ακρίβεια στην ανίχνευση πρώιμου HCC σε ασθενείς με κίρρωση ήπατος.78 Ο ορός που κυκλοφορεί MiR-107 έχει επίσης αξιολογηθεί στα αρχικά στάδια του HCC, 79 και έχει δείξει καλές δυνατότητες σε πληθυσμούς υψηλού κινδύνου.Οι Zhou et al ανέφεραν ότι μια ομάδα miRNAs (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a και miR-801) μπορεί να διαφοροποιήσει το HCC από τη χρόνια ηπατίτιδα Β (CHB) και την κίρρωση η ευαισθησία ήταν 79,1% και 75% και η ειδικότητα 76,4% και 91,1%, αντίστοιχα.80 Στο HCC που σχετίζεται με τον HBV, διαπιστώσαμε ότι τα επίπεδα miR150 μειώθηκαν σημαντικά σε σύγκριση με αυτά σε ασθενείς με χρόνια HBV χωρίς HCC (ευαισθησία 79,1%, ειδικότητα 76,5%).Το -224 ήταν αυξημένο στο HCC σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες και οι αναλύσεις υποομάδας έδειξαν υψηλότερα επίπεδα σε ασθενείς με HCC που σχετίζεται με HBV.Οι ασθενείς με κίρρωση που σχετίζεται με ηπατίτιδα Β και HCC αναγνώρισαν έναν ταξινομητή siRNA που περιέχει επτά διαφορικά εκφραζόμενα siRNA που μπορούν να ανιχνεύσουν το HCC σε διαφορετικούς μάρτυρες.Το εύρος AUC στον πρώιμο έλεγχο είναι καλύτερο από τους εθελοντές AFP.Βρήκαν ότι τέσσερα miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p και miR-365a-3p) μπορούσαν να διακρίνουν τους ασθενείς με HCC από τους ασθενείς χωρίς HCC.Πέντε υπερεκφραζόμενα miRNAs (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p και miR-148a-3p) θεωρούνται πιθανές λοιμώξεις από HBV σε βιοδείκτες HCC, κίρρωση και CHB, ιδιαίτερα Το miR-34a-5p μπορεί να είναι βιοδείκτες για κίρρωση του ήπατος,85 και μπορεί να είναι δυνητικοί βιοδείκτες για έγκαιρο έλεγχο του HCC σε πληθυσμούς υψηλού κινδύνου.Το πιο μελετημένο lncRNA στο HCC ενεργοποιείται σε μεγάλο βαθμό στον καρκίνο του ήπατος (HULC).Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι το HULC που κυκλοφορεί σε ασθενείς με HCC μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως διαγνωστικός δείκτης, επειδή αυτό το lncRNA ρυθμίζεται σε μεγάλο βαθμό σε ασθενείς με HCC σε σύγκριση με υγιή άτομα.71,86 Μεταξύ άλλων lnRNA, το LINC00152 θεωρείται το καλύτερο διαγνωστικό lncRNA λόγω της υψηλής AUC, της ευαισθησίας και της ειδικότητάς του.86 Σε μια μελέτη, η έκφραση του LINC00152 στο περιφερικό αίμα αυξήθηκε σταδιακά από φυσιολογικούς υγιείς μάρτυρες σε ασθενείς με CHB και κίρρωση και τελικά ήταν υψηλότερη στο HCC.Μελέτες της έκφρασης του circSMARCA5 στο πλάσμα ασθενών με HCC έδειξαν προοδευτική μείωση της έκφρασης του HCC που κυμαίνεται από ηπατίτιδα έως κίρρωση και προκαρκινικές αλλοιώσεις.87 Η ανάλυση των καμπυλών ROC επιβεβαίωσε τη δυνατότητα αυτών των circRNA στη διάκριση των ασθενών με ηπατίτιδα ή κίρρωση του ήπατος από εκείνους με HCC, ειδικά εκείνους με επίπεδα AFP κάτω από 200 ng/mL.Επιπλέον, ο Zhu ανέλυσε 13.617 κυκλικά RNA σε δείγματα πλάσματος από ασθενείς με HCC που σχετίζονται με HBV και επιβεβαίωσε ότι 6 κυκλικά RNA εκφράστηκαν διαφορετικά στην κίρρωση HCC και σχετιζόμενη με HBV, υποδηλώνοντας ότι τα cRNAs μπορεί να είναι ευεργετικά.δείκτες για πρώιμο έλεγχο των ομάδων υψηλού κινδύνου όπως αυτές που σχετίζονται με ηπατική νόσο, ασθενείς με σκλήρυνση.88
Τα εξωσώματα είναι κυστίδια μεμβράνης διαμέτρου 40–160 nm.πολλαπλά ενδοκυτταρικά κυστίδια συγχωνεύονται με την κυτταρική μεμβράνη και απελευθερώνονται στην εξωκυτταρική μήτρα.Περιέχουν πολλά ενεργά συστατικά, συμπεριλαμβανομένων λιπιδίων, πρωτεϊνών, RNA και DNA, και παίζουν βασικό ρόλο στην επικοινωνία μεταξύ των κυττάρων, τόσο των HCC όσο και των μη HCC κυττάρων.89,90 Τα εξωσώματα ρυθμίζουν την εξέλιξη του HCC ενεργοποιώντας ινοβλάστες ηπατοκυττάρων και αστερικά κύτταρα, ανοσοκύτταρα, φυσιολογικά ηπατοκύτταρα και κύτταρα HCC.91 Στο μικροπεριβάλλον του όγκου, τα καρκινικά κύτταρα παράγουν μεγάλο αριθμό εξωσωμάτων που μεταφέρονται από καρκινικά κύτταρα σε ανώριμα κύτταρα, τα οποία με τη σειρά τους εμπλέκονται στην ογκογένεση, την αποδόμηση και την κυτταρική σηματοδότηση.92 Μελέτες έχουν δείξει ότι τα εξωσώματα μπορούν να μεταφέρουν ογκογονίδια σε φυσιολογικά κύτταρα κατά τη διάρκεια παθολογικών διεργασιών, που μπορεί να είναι ένας από τους μηχανισμούς εισβολής και μετάστασης όγκου.93 Ο ρόλος των εξωσωμάτων στην εξέλιξη του καρκίνου μπορεί να είναι δυναμικός και ειδικός για τον τύπο καρκίνου. μεσολαβούν στην κυτταρική σηματοδότηση και τον μεταβολισμό.94 Τα χαρακτηριστικά και οι δυναμικές αλλαγές των μορίων φορτίου εξωσώματος αντικατοπτρίζουν άμεσα τα χαρακτηριστικά και τις δυναμικές αλλαγές των γονικών καρκινικών κυττάρων,95 που αποτελεί επίσης τη βάση για τη χρήση των εξωσωμάτων στη διάγνωση και την πρόγνωση του καρκίνου, καθώς και για την πρόβλεψη της ατομικής ανταπόκρισης στην αντικαρκινική θεραπεία ..96
Οι παραδοσιακές εργαστηριακές μέθοδοι για την απομόνωση και την ανάλυση των εξωσωμάτων είναι πολύπλοκες, πολυβάθμιες και χρονοβόρες, συμπεριλαμβανομένης της υπερφυγοκέντρησης, της διήθησης, της χρωματογραφίας αποκλεισμού μεγέθους, του καθαρισμού ανοσοσυγγένειας, του Western blotting, της ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας (ELISA), της ανάλυσης PCR και ροής.Τα μικροσκοπικά συστήματα και οι πλατφόρμες εργαστηρίου σε τσιπ που χρησιμοποιούν μικρο/νανοτεχνολογία αναπτύσσονται ευρέως για γρήγορη, βολική in situ απομόνωση εξωσωμάτων.Η ανάλυση παρακολούθησης νανοσωματιδίων (NTA) είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος για τον χαρακτηρισμό του μεγέθους και της συγκέντρωσης των εξωσωμάτων, συμπεριλαμβανομένων μεθόδων όπως τα μαγνητικά νανοσωματίδια και τα πολυϋδροξυαλκανοϊκά.Οι μικρορευστικές και ηλεκτροχημικές μέθοδοι μπορούν επίσης να ανιχνεύσουν γρήγορα εξωσώματα σε υψηλές αποδόσεις.
Οι εξωσωματικές πρωτεΐνες είναι σημαντικοί δείκτες για τη διάγνωση του HCC.Στη μελέτη Arbelaiz, το επίπεδο της πρωτεΐνης δέσμευσης 98 RasGAP SH3 (G3BP) και του πολυμερούς υποδοχέα ανοσοσφαιρίνης (PIGR) ήταν σημαντικά αυξημένο σε εξωσώματα που προέρχονται από HCC και η πιθανή συνδυασμένη αποτελεσματικότητα των δύο πρωτεϊνών ήταν ανώτερη από εκείνη της AFP.Η υπερφόρτωση σιδήρου είναι ένας σημαντικός παράγοντας που συμβάλλει στην ανάπτυξη του HCC.Ο Tseng ανέφερε ότι η εψιδίνη μπορεί να παίζει βασικό ρόλο στην αντοχή στο HCC.99 Τα εξωσώματα που προέρχονται από τους ορούς ασθενών με HCC είχαν σημαντικά υψηλότερο αριθμό αντιγράφων παραλλαγών mRNA της εψιδίνης από τα υγιή αντίστοιχά τους, υποδηλώνοντας ότι η εψιδίνη μπορεί να είναι ένας νέος διαγνωστικός βιοδείκτης για HCC.Η πρωτεΐνη 14-3-3ζ στα εξωσώματα που παράγεται από 100 HCC μπορεί να μειώσει την ενεργοποίηση, τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των Τ κυττάρων και μπορεί να προκαλέσει μετασχηματισμό Τ κυττάρων σε ρυθμιστικά Τ κύτταρα, με αποτέλεσμα την εξάντληση των Τ κυττάρων.101 Αυτό υποστηρίζεται από διάφορες μελέτες που διερευνούν την διαφυγή όγκου από την ανοσολογική επιτήρηση, 102 που μπορεί να συμβάλει στην ογκογένεση HCC.
Εκτός από την παρουσία του ecRNA στο πλάσμα ή τον ορό, τα εμπλουτισμένα με RNA εξωσώματα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για μη επεμβατική σταδιοποίηση σε πραγματικό χρόνο στον πρώιμο έλεγχο του όγκου και για τον προσδιορισμό της εξέλιξης του όγκου και της ανταπόκρισης στη θεραπεία.Το επίπεδο του εξωσωματικού miRNA-21 στον ορό του αίματος στην ομάδα HCC ήταν 2,21 φορές υψηλότερο από ό,τι στην ομάδα CHB και στην ομάδα HCC ήταν 5,57 φορές υψηλότερο από ό,τι στον υγιή πληθυσμό.Στη μελέτη Wang, τα εξωσώματα αύξησαν σημαντικά το HCC σε σύγκριση με τους κιρρωτικούς ασθενείς με τιμές AUC 0,83 (95% CI 0,74–0,93) και 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 Τα δεδομένα που ελήφθησαν διευκρίνισαν τη συμμετοχή συγκεκριμένων εξωσωματικών μορίων φορτίου στη ρύθμιση της ογκογένεσης και της εξέλιξης του HCC.105 Η έκφραση στον ορό των miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 και miR-26a είναι συνεπής.και μετάσταση και τα επίπεδα miR21 ήταν πολύ υψηλότερα σε ασθενείς με HCC από ό,τι σε υγιείς μάρτυρες και επίσης σε ασθενείς με CHB.102 Το LncRNA είχε πιθανή διαγνωστική αξία στο HCC.Μελέτες έχουν δείξει ότι τα εξωσώματα που προέρχονται από τον ορό ασθενών με HCC έχουν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα LINC00161, LINC000635 και lncRNA που ενεργοποιούνται με μετασχηματισμό του αυξητικού παράγοντα-β σε σχέση με ασθενείς χωρίς HCC, και αυτά τα lncRNA συνδέονται ισχυρά με το στάδιο TNM και τον όγκο του όγκου.110 Conigliaro et al.Τα εξωσώματα CD90+ βρέθηκαν να εκφράζουν υψηλά επίπεδα lncRNAH19, το οποίο αύξησε σημαντικά την απελευθέρωση του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) και την παραγωγή υποδοχέα VEGF-R1, διεγείροντας έτσι την αγγειογένεση.93 Τα CircRNA είναι ένας άλλος τύπος εξωσωματικών ncRNA – που εκφράζονται σε χαμηλότερα αλλά σταθερά επίπεδα μεταξύ των ειδών, τα circRNA δείχνουν επίσης ειδικότητα για τον τύπο κυττάρου, τον τύπο ιστού, το αναπτυξιακό στάδιο και τη ρυθμιστική δραστηριότητα.Τα 111 circRNA είναι διαγνωστικοί βιοδείκτες για πρώιμο και ελάχιστα διηθητικό καρκίνο.112 Πρόσφατες κλινικές δοκιμές έδειξαν ότι η ειδικότητα των μεμονωμένων miRNAs στην πρόβλεψη του HCC δεν είναι ιδανική.Επομένως, η ανίχνευση συμπλόκου χρησιμοποιώντας πολλαπλές αναλύσεις (π.χ. miR-122 και miR-48a σε συνδυασμό με AFP) μπορεί να βελτιώσει την αναγνώριση του πρώιμου HCC και τη διαφοροποίηση του HCC από την κίρρωση.100
Οι ασθενείς με CHB και κίρρωση του ήπατος είναι η πιο κοινή ομάδα υψηλού κινδύνου για ανάπτυξη HCC.Για τις ομάδες υψηλού κινδύνου, μόλις επιτευχθεί μια παρατεταμένη ιολογική ανταπόκριση, θα πρέπει να αναπτυχθεί μια οικονομικά αποδοτική στρατηγική επιτήρησης βασισμένη στον κίνδυνο HCC και ο έγκαιρος έλεγχος είναι το κλειδί για τη βελτίωση της διάγνωσης και της θεραπείας του HCC με υψηλή αναλογία κόστους-αποτελεσματικότητας2 ..Οι μέθοδοι πρώιμου προσυμπτωματικού ελέγχου για τον καρκίνο έχουν πολλούς περιορισμούς: αποτελεσματικές μέθοδοι έγκαιρου προσυμπτωματικού ελέγχου δεν έχουν αναπτυχθεί για τους περισσότερους τύπους καρκίνου και η συμμόρφωση είναι συνήθως χαμηλή.Σε σύγκριση με τις παραδοσιακές μεθόδους πρώιμου προσυμπτωματικού ελέγχου, η τεχνολογία υγρής βιοψίας έχει προφανή πλεονεκτήματα: ευκολία δειγματοληψίας, ανίχνευση panrac, καλή αναπαραγωγιμότητα του δείγματος και αποτελεσματική απόκριση στην ετερογένεια του όγκου.Δεδομένης της οικονομικής αποδοτικότητας των μεθόδων που σχετίζονται με την υγρή βιοψία, η χρήση τους στον προσυμπτωματικό έλεγχο HCC δεν έχει δοκιμαστεί τακτικά.Παρά τις προόδους στην ακριβή ανίχνευση σε μοριακό επίπεδο, η βιοψία υγρού είναι δαπανηρή για την ανίχνευση του HCC σε ασθενείς-στόχους, περιορίζοντας την ευρεία χρήση του σε σύγκριση με ειδικές απεικονιστικές διαδικασίες όπως ο υπέρηχος και η μαγνητική τομογραφία.113.114 Ωστόσο, μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η υγρή βιοψία έδειξε σημαντικό όφελος όσον αφορά τα προσαρμοσμένα στην ποιότητα έτη ζωής (QALYs).115 Τα οφέλη της υγρής βιοψίας στο πρώιμο καρκίνωμα του στομάχου και του ρινοφάρυγγα έχουν επίσης αποδειχθεί.116.117 Η τρέχουσα άποψη είναι ότι η υγρή βιοψία μπορεί να συμπληρώσει τους βιοδείκτες ορού και τον ακτινολογικό έλεγχο για την ανίχνευση και τη διάγνωση όγκων.117 118
Σύμφωνα με την τρέχουσα βιβλιογραφία, η τεχνολογία βιοψίας υγρών έχει δείξει σημαντικά υψηλότερη ευαισθησία και ειδικότητα στον έγκαιρο έλεγχο των ομάδων υψηλού κινδύνου για καρκίνο του ήπατος.Ανεξάρτητα από τον τύπο της βιοψίας υγρού, μπορεί να διακρίνει το HCC από τα άτομα υψηλού κινδύνου χωρίς HCC, υποδηλώνοντας τη σημασία του πρώιμου ελέγχου καθώς είναι εμφανείς οι διαφορές μεταξύ ατόμων υψηλού κινδύνου και υγιών ατόμων.Το ctDNA έχει σύντομο χρόνο ημιζωής και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση HCC, επομένως τυχόν αλλαγές στο cDNA που προέρχεται από όγκο μπορεί να παρέχουν σε πραγματικό χρόνο συγκεκριμένες ενδείξεις εξέλιξης του όγκου, ειδικά για μικρούς όγκους.Ένα υψηλό επίπεδο ctDNA υποδηλώνει την ανάπτυξη και εξάπλωση του καρκίνου και αποτελεί πρώιμο δείκτη εξέλιξης και υποτροπής.Επιπλέον, με βάση τα αποτελέσματα του ctDNA, οι ασθενείς μπορούν να λάβουν εξατομικευμένη θεραπεία και παρακολούθηση.119 Συγκεκριμένες θέσεις μεθυλίωσης μπορεί να είναι καλύτερος δείκτης από το AFP για την πρώιμη αναγνώριση HCC και κιρρωτικών όζων.Σε εξαιρέσιμες περιπτώσεις HCC, τα υψηλά επίπεδα cDNA είναι ενδεικτικά μικροαγγειακής εισβολής και μετεγχειρητικής υποτροπής και μετάστασης.Οι αλλαγές στον αριθμό των αντιγράφων σχετίζονται με την επιβίωση των ασθενών με ΗΚΚ.Μπορεί να υποτεθεί ότι η αξιολόγηση cDNA μπορεί να εμπλέκεται στη συνολική θεραπεία του HCC και το cDNA μπορεί να χρησιμεύσει ως αποτελεσματικός δείκτης της θεραπευτικής διαμόρφωσης.Οι δείκτες που βασίζονται σε συγκεκριμένες γενετικές μεταλλάξεις στο ctDNA έχουν υιοθετηθεί από κλινικές οδηγίες για την πρόβλεψη της αποτελεσματικότητας και την παρακολούθηση της αντοχής στα φάρμακα.Η εξέταση ctDNA μπορεί να είναι το πιο χρήσιμο εργαλείο υγρής βιοψίας για πρώιμο έλεγχο.Τα CTC διαδραματίζουν επίσης βασικό ρόλο στον έγκαιρο έλεγχο των ομάδων HCC υψηλού κινδύνου.Διάφοροι δείκτες CTC που σχετίζονται με HCC έχουν ιδιαίτερη σημασία για την εμφάνιση, την ανάπτυξη και την υποτροπή του HCC.Ως μεμβρανικά κυστίδια, τα εξωσώματα εμπλέκονται στις μεσοκυτταρικές επικοινωνίες, ειδικά στα κύτταρα HCC.Τα κυκλοφορούντα microRNA είναι σταθερά στο αίμα και επομένως μπορεί να είναι πιο χρήσιμα για τον πρώιμο έλεγχο του HCC.Σταδιακά, ανακαλύφθηκαν εξωσωματικές πρωτεΐνες και πλούσια σε RNA εξωσώματα και επιβεβαιώθηκε η προγνωστική τους αποτελεσματικότητα για HCC.Είναι ενδιαφέρον ότι διαφορετικές αιτιολογίες HCC μπορεί επίσης να σχετίζονται με διαφορετικές μεταλλάξεις, επομένως μπορούμε να επιλέξουμε διαφορετικούς βιοδείκτες για πρώιμο έλεγχο με βάση διαφορετικές αιτιολογίες HCC.120
Ωστόσο, οι τρέχουσες τεχνικές βιοψίας υγρού είναι αμφισβητήσιμες όσον αφορά τη σταθερότητα και δεν μπορούν να πραγματοποιήσουν ανεξάρτητα τον πρώιμο έλεγχο ή την παρακολούθηση του HCC, αλλά μπορούν να συμπληρώσουν τον ατομικό έλεγχο και τη διάγνωση.121 Ως μορφή υγρής βιοψίας, η ανίχνευση και η απεικόνιση ctDNA, CTC, cfRNA και AFP ή PIVKA-II που σχετίζεται με εξώσωμα έχουν πολλά υποσχόμενες εφαρμογές στην έγκαιρη διάγνωση και πρόγνωση του HCC.Ωστόσο, ο ακριβής μηχανισμός απελευθέρωσης του ctDNA στο αίμα μένει να διευκρινιστεί.Η αποκάλυψη των βασικών βιολογικών ιδιοτήτων του ctDNA μπορεί να διευκολύνει τη χρήση του ως δείκτη.Η μικρή ποσότητα ctDNA στην κυκλοφορία και οι αυστηρές απαιτήσεις χειρισμού δειγμάτων αποτελούν προκλήσεις για την κλινική εφαρμογή της ανίχνευσης cDNA στο HCC.Επιπλέον, οι γενετικές μεταλλάξεις δεν έχουν συγκεκριμένα χαρακτηριστικά που επιτρέπουν τον ακριβή εντοπισμό των καρκινογόνων παραγόντων.Δεδομένου ότι πολλές γενετικές και σωματικές παραλλαγές υπάρχουν επίσης σε φυσιολογικούς ιστούς, οι γενετικές μεταλλάξεις που εντοπίζονται με βιοψία υγρού μπορεί να είναι περιορισμένης χρησιμότητας στον πρώιμο έλεγχο για HCC.122 Οι περιορισμοί των καλά καθορισμένων χρήσιμων γονιδιακών στόχων και βιοδεικτών που βοηθούν στη διαφοροποίηση του cDNA από το μη όγκου DNA είναι τα πιο σημαντικά ζητήματα στη χρήση του cDNA.έλλειψη χρησιμότητας ευαίσθητων και ειδικών δεικτών για την ανίχνευση CTC.Βρέθηκαν μόνο βιώσιμα κύτταρα με μεταστατικό δυναμικό και ο βέλτιστος συνδυασμός δεικτών εμπλουτισμένων με CSC ήταν ασαφής.Η απομόνωση των CTC για καλλιέργεια και η αξιολόγηση των μεταλλακτικών προφίλ τους είναι επίσης μια πρόκληση.Λόγω προβλημάτων με την ταυτοποίηση, την απομόνωση και τον καθαρισμό των εξωσωμάτων, ο συγκεκριμένος μοριακός μηχανισμός είναι ακόμα ασαφής και προηγούμενες μελέτες σχετικά με τον μηχανισμό των εξωσωμάτων και του HCC δεν έχουν γίνει σε βάθος και ο τρόπος με τον οποίο τα miRNA, lncRNA και πρωτεΐνες ταξινομούνται σε εξωσώματα , και δεν είναι σαφές εάν η πρόσληψη εξωσώματος είναι μια διαδικασία συγκεκριμένου τύπου.Η χρήση εξωσωμάτων για τη διάγνωση και τη θεραπεία του ΗΚΚ βρίσκεται ακόμη στο προκλινικό στάδιο.Η έλλειψη τυποποίησης των διαδικασιών υγρής βιοψίας, όπως ο τύπος των σωλήνων που χρησιμοποιούνται για τη συλλογή αίματος, τον όγκο αίματος, την αποθήκευση και ανίχνευση δείγματος, την απομόνωση και τον εμπλουτισμό, μπορεί να αποκλείσει τη χρήση τους στη συνήθη κλινική πρακτική λόγω διαφορών στις πρακτικές μεταξύ των ιατρικών κέντρων.Η αποτελεσματικότητα της υγρής βιοψίας στον πρώιμο έλεγχο, τη διάγνωση, την αξιολόγηση αποτελεσματικότητας και την πρόβλεψη του HCC παραμένει προς διερεύνηση, ειδικά για ομάδες υψηλού κινδύνου.Η τεχνολογία υγρής βιοψίας έχει μεγάλες δυνατότητες και αναμένεται να χρησιμοποιηθεί ευρέως στην κλινική πρακτική του καρκίνου του ήπατος στο εγγύς μέλλον.
1. Sung Η., Furley J., Siegel RL et αϊ.Παγκόσμιες Στατιστικές Καρκίνου 2020: Το GLOBOCAN εκτιμά τη συχνότητα εμφάνισης και τη θνησιμότητα από 36 τύπους καρκίνου σε 185 χώρες.CA Cancer J Clin.2021; 71 (3): 209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Έδρα της Εθνικής Επιτροπής Υγείας.Κριτήρια για τη διάγνωση και τη θεραπεία του πρωτοπαθούς καρκίνου του ήπατος (έκδοση 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun Η, Wang Ζ, et αϊ.Οδηγίες για τη διάγνωση και τη θεραπεία του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (έκδοση 2019).Καρκίνος στο συκώτι.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo Ν, Takemura Ν, Hasegawa Κ, et αϊ.Οδηγίες κλινικής πρακτικής για ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα: Ιαπωνική Εταιρεία για Νόσους του Ήπατος, 2017 (JSH-HCC 4th guidelines), ενημέρωση 2019.Δεξαμενή για τη νόσο του ήπατος.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Υγρή βιοψία σε χρόνια ηπατική νόσο.Αν Χέπατο.2021; 20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Βιοψία υγρού καρκίνου του μαστού: μια εστιασμένη ανασκόπηση.Arch Pathol Lab Med.2021; 145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Surveillance για ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα: τρέχουσες βέλτιστες πρακτικές και μελλοντικές κατευθύνσεις.Γαστρεντερολογία.2019; 157 (1): 54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Κλινικές οδηγίες EASL-EORTC: θεραπεία ηπατοκυτταρικού καρκινώματος.J Ηπαρίνη.2012; 56 (4): 908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Συνδυασμένη ανάλυση AFP και HCCR-1 ως χρήσιμοι ορολογικοί δείκτες σε μικρό ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα: μια προοπτική μελέτη κοόρτης.Dis Mark.2012; 32 (4): 265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen Η, Gao S, et αϊ.Διαφορική έκφραση του microRNA-125b του πλάσματος σε ηπατική νόσο που σχετίζεται με τον ιό της ηπατίτιδας Β και διαγνωστική δυνατότητα του επαγόμενου από τον ιό της ηπατίτιδας Β ηπατοκυτταρικού καρκινώματος.Δεξαμενή ηπατικής νόσου.2017; 47 (4): 312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo Μ. et al.Βιολογία και σημασία της άλφα-εμβρυοπρωτεΐνης στο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα.Ήπατος ενθ.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata Μ, Cheng AL, Kokudo Ν, et αϊ.Κλινικές οδηγίες για τη θεραπεία του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος στην περιοχή Ασίας-Ειρηνικού: ενημέρωση 2017.Διεθνής Οργανισμός για τις παθήσεις του ήπατος.2017; 11 (4): 317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Διαγνωστική αξία του ορού PIVKA-II μόνο του ή σε συνδυασμό με AFP σε Κινέζους ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα.Dis Mark.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines Α., Basset S. et al.Μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα Βιοψία χυμικού υγρού μη πλάσματος: πιο κοντά στον όγκο!κύτταρο.2020; 9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Liquid biopsy: τρέχουσα κατάσταση και μελλοντικές προοπτικές.Θεραπεία Oncol Res.2017; 40 (7-8): 404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio Ρ, et al.Βιοψία καρκίνου με βάση το υγρό: ένα πολυτροπικό διαγνωστικό εργαλείο στην κλινική ογκολογία.The Adv Med Oncol.2018; 10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nucleic acids in human plasma.CR Seances Soc Biol Fil.1948, 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Προηγμένη ανίχνευση κυκλοφορούντος όγκου DNA με ανάλυση μεγέθους θραυσμάτων.Η επιστήμη μεταφράζει την ιατρική.2018; 10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Μήκος θραύσματος DNA κυκλοφορούντος όγκου.γονίδια PLOS.2016; 12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Κυκλοφορούμενο DNA όγκου: ένας πολλά υποσχόμενος βιοδείκτης στη βιοψία καρκίνου με βάση το υγρό.όγκος στόχος.2016; 7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen Μ., Leary RJ et al.Ανίχνευση κυκλοφορούντος όγκου DNA σε πρώιμα και όψιμα στάδια ανθρώπινων κακοηθειών.Η επιστήμη μεταφράζει την ιατρική.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Liquid biopsy for mutational predictive analysis of solid cancer: a pathologist's view.J Βιοτεχνολογία.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Πρώιμη ανίχνευση όγκου με έλεγχο του κυκλοφορούντος DNA του πλάσματος: διαφημιστική εκστρατεία ή ελπίδα;Βελγικό κλινικό δίκαιο.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Επίδραση του ιού της ηπατίτιδας και της γήρανσης στη μεθυλίωση του DNA στην ανθρώπινη ηπατοκαρκινογένεση.Ιστοπαθολογία.2010, 25(5):647–654.doi: 10,14670/HH-25,647


Ώρα δημοσίευσης: Σεπ-23-2022